目的比较不同细菌富集法联合基质辅助激光解吸电离时间飞行质谱（MALDI-TOF MS）快速鉴定血培养阳性瓶病原菌的效果，建立经济、有效、快速的前处理法。方法收集2024年1-6月普洱市人民医院检验科阳性报警血培养瓶共164份，经涂片镜检确认为单一菌阳性后分别采用分离胶促凝管法、十二烷基硫酸钠（SDS）法和Percoll细胞分离液密度梯度离心法（Percoll法）对阳性血培养样本进行细菌富集和纯化，并联合MALDI-TOF MS快速鉴定。以常规培养获得的纯菌落质谱结果为参考，比较分析3种细菌富集法快速鉴定结果的检出率和符合率。结果164份阳性血培养样本经常规培养鉴定单一菌包括革兰阴性菌65株、革兰阳性菌92株、真菌7株。分离胶促凝管法、SDS法和Percoll法3种方法对革兰阳性菌、革兰阴性菌、真菌的检出率差异无统计学意义（P＞0.05）。分离胶促凝管法对革兰阴性菌的检出率高于革兰阳性菌，差异有统计学意义（P＜0.05）。SDS法和Percoll法对革兰阳性菌、革兰阴性菌的检出率差异有统计学意义（P＜0.05）。对于单一菌阳性瓶的快速鉴定，三种方法的检出率差异无统计学意义（P＞0.05）。分离胶促凝管法、SDS法和Percoll法在＞2.000鉴定分值下的符合率分别为45.73%、61.58%和64.02%，差异有统计学意义（χ 2=13.21，P＜0.05）。结论分离胶促凝管法、SDS法及Percoll法联合MALDI-TOF MS直接鉴定阳性血培养瓶中的病原菌均具有较高的可行性和检出率。